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高分辨率/高亮度熒光成像用透明化方法SeeDB2

北京拜爾迪 (1000 x 120 像素)--2.jpg

SeeDB2 Trial Kit是用于SeeDB2法的透明化試劑盒,通過調(diào)整Permeabilization solution、Clearing Solution等各種試劑,可實現(xiàn)透明化。該方法由柯孟岑老師、今井猛博士等人開發(fā),通過制備試劑盒內(nèi)的溶液并浸泡腦組織塊,即可實現(xiàn)透明化。特別適用于通過熒光蛋白標記樣本的3D高分辨率成像。


該方法保留了腦組織的微結構,由于調(diào)節(jié)為高折射率(RI=1.52),適用于高分辨率成像,也可應用于迄今為止難以進行的樹突棘定量分析。


對照SeeDB2G的甘油折射率(1.46)和SeeDB2S的油折射率(1.52),分別用甘油浸沒鏡頭和油浸鏡頭觀察,可見即使在深層部分也沒有因為球面像差而引起模糊(分辨率降低)。


此外值得注意的是在SeeDB2中,熒光蛋白的熒光保持非常穩(wěn)定,并且優(yōu)于PBS和其他市售的封固劑。因此,SeeDB2十分適合作為熒光蛋白標記樣本的封固劑。它不僅可用于厚樣本,還可用于細胞生物學的薄樣本和組織切片。

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數(shù)據(jù)提供:國立研究開発法人理化學研究所柯孟岑先生、今井猛先生(現(xiàn)九州大學醫(yī)學研究院)

本試劑盒內(nèi)容:1)皂素、2)SeeDB2G solution、3)SeeDB2S solution、4)PBS


◆SeeDB2特點

● 可在保留微結構的同時完成透明化

● 調(diào)整為高折射率,可觀察深層結構

● 穩(wěn)定維持來自熒光蛋白的熒光

※Alexa等染料會出現(xiàn)褪色


◆經(jīng)實例驗證可透明化處理的樣本

小鼠腦組織塊、蒼蠅全腦、類器官/球狀體


◆SeeDB2 Trial Kit試劑盒構成

1. SeeDB2G Solution 50 mL x 1支

2. SeeDB2S Solution 50 mL x 1支

3. PBS(-)50 mL x 1支

4. Saponin 5 g x 1支


SeeDB2S:與油浸物鏡浸液的折射率(1.52)相匹配,可用作油浸鏡頭觀察時的封片劑。用于高分辨率成像。


SeeDB2G:與甘油浸物鏡浸液的折射率(1.46)相匹配,可用作甘油浸鏡頭觀察時的封片劑。用于觀察較大的組織樣本。


◆透明化所需試劑或器材(具體請參考附件)

試劑

1. SeeDB2 Trial Kit

2. 多聚甲醛(產(chǎn)品編號:160-16061)

3. 1×PBS(產(chǎn)品編號:164-25511)

4. 透鏡浸液


器材

1. 環(huán)形鑷子或畫筆

2. 試管旋轉器

3. 無菌過濾器

4. 振動切片機

5. 透明化樣品觀察容器(透明室)

6. 玻璃載玻片和蓋玻片(如使用透明室則不需要)

7.  用于SeeDB2透明化樣本的熒光顯微鏡和推薦物鏡※※

※ 共焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、超分辨率顯微鏡

※※ 請使用與折射率(RI=1.46或1.52)相匹配的物鏡。建議在獲取數(shù)據(jù)前向顯微鏡制造商咨詢。


◆Protocol示例

小鼠腦0.5-2mm切片

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● Permeabilization Solution:含2% saponin的PBS溶液

● Clearing Solution 1:含20% saponin的水溶液和SeeDB2G以2:1比例混合的溶液

● Clearing Solution 2:含20% saponin的水溶液和SeeDB2G以1:1比例混合的溶液

● Clearing Solution3:含2% saponin的SeeDB2G

● Clearing Solution 4:含2% saponin的SeeDB2S

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圖1. 小鼠腦SeeDB透明化案例

小鼠腦切片(1.5mm厚)的SeeDB2處理前后



◆應用示例

● 共聚焦顯微鏡觀察實例

● 超分辨率顯微鏡觀察實例

● 神經(jīng)細胞的多色熒光成像


使用共聚焦顯微鏡觀察小鼠腦切片的實例

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圖2. 使用共聚焦顯微鏡觀察Thy1-YFP H系小鼠腦切片

使用NA 1.4油浸物鏡。即使不調(diào)整激光功率,從上到下得到的亮度也幾乎恒定。比例尺為2 μm



超分辨率顯微鏡觀察實例

在超分辨顯微鏡下觀察使用SeeDB2S/Super Clear Mount(產(chǎn)品編號:190-18661)進行了透明化和封片處理的樣品(圖3、4)

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圖3. 絲狀偽足在細胞膜上的生長

使用核染色試劑和線粒體染色試劑對在細胞膜上表達EGFP的HEK293T細胞進行染色和觀察。通過超分辨率數(shù)據(jù)可觀察到絲狀偽足在細胞膜上的生長(圖3)。


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圖4. 果蠅大腦深部的超分辨率成像(深度約100 μm)

使用GFP標記Mi1(果蠅腦髓質(zhì)神經(jīng)節(jié)中的一個神經(jīng)細胞)并進行超分辨率觀察(圖4)。


神經(jīng)細胞的多色熒光成像

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圖5. 使用Tetbow法進行神經(jīng)細胞的多色熒光成像

使用Tetbow法 標記小鼠嗅球二尖瓣細胞和簇狀細胞的數(shù)據(jù)。比例尺為20 μm。

※ Tetbow法:使用不同顏色對單個神經(jīng)細胞進行高亮度染色。


◆產(chǎn)品列表

品牌產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱等級規(guī)格
FUJIFILM Wako294-80701SeeDB2 Trial Kit
SeeDB2試劑盒
Tissue Optical Clearing Reagent1kit


北京拜爾迪是FUJIFILM wako授權代理商,更多產(chǎn)品,敬請咨詢!

熱線:010-62960866

網(wǎng)址:www.onenes.cn

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